这个概念一般是用在定量PCR中。定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差(比如提RNA时的损失),所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照。这个基因就是内参基因,这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因,
如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基
如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基
关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他的内参,人们的回答往往
关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他
基因组DNA拷贝数变化在许多人类疾病如肿瘤、遗传性疾病的发生发展中起重要作用,也是这些疾病的细胞遗传学表现。染色体显带已被运用了几十年,具有其高度的可靠性并成为染色体分析的金标准,但其分辨率低(约为5~10Mb),需要中期细胞,操作费时。
1. 判断样品提取是否成功。假如你提取了总RNA然后再做逆转录得到cDNA,然后再去跑PCR发现没有结果,是不是表示样品中没有你的目的基因呢?答案是:不一定。要根据使用同一模板跑出的内参基因的结果才可判断。内参基因的CT在一个合理范围(比如20左右)的前提下,才能说明样品制备没问题,在这个前提下,做
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
内参即是内部参照,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物 你可以去生物帮那里了解这方面的信息,那儿技术文档、视频资源丰富,我很喜欢到那里找想要的东西,而且还有很多软件可以下载,并且有软件的教材。有时间可以去看看。 包括GAPDH 、β- actin(BETA-
通常它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。内参基因通常是持家基因(house-keeping gene)因为其表达水平受环境因素影响较小,而且在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化很小。常用的内参基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti
好的内参基因应该受环境影响变化较小,否则不能作为对照与处理的内参。常用内参有actin,ubiquitin,histone等等,一般物种都有常用内参,不建议在这方面发挥。
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参
这个是根据定量PCR算法决定的,如果是相对定量,就需要内参,内参主要是使样品均一化,你做实验的时候,可能提取RNA时所用的样品是相同的,反转录时所用的mRNA的量是相同的,做定量PCR时所加的cDNA量也是相同的。但是你的样品是新长的部分,还是老的部分?反转录时是加相同的体积还是相同打质量,这些对结
内参就是取在一般细胞当中表达量较为稳定的基因,你的目的基因要与其进行比较。因为你每次的样品不一定一样,所以必须要有内参进行校正。要是内参没有起峰,那这个数据基本没用。
不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量(CT值差)过大,用内参基因来衡量目标基因的表达量(绝对值)就不完全可靠,但至少可以说明目标基因表达非常低。
如何通过荧光定量目的基因和GAPDH计算相对表达量内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH, actin。或者18s rRNA也可以。如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致。如果出入很大,说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基