MRD从血液肿瘤领域的成熟运用，到实体瘤领域临床实践落地，预后价值正在逐步走向预测价值，贯穿肿瘤各分期全病程。伴随着多项干预性临床试验的开展，在未来以MRD为结果的精准诊疗，有望改写肿瘤治疗格局，给患者带来极大的生存获益。本期以问答的形式科普MRD的方方面面。

基础知识篇

1.什么是MRD？

MRD具有多种表述：微小残留病灶（Minimal Residual Disease）、可测量残留病灶（Measurable Residual Disease）和分子残留病灶（Molecular Residual Disease）。其概念由血液肿瘤逐步延伸至实体肿瘤，主要指经过治疗后，传统影像学或实验室方法不能发现，但通过液体活检发现的癌来源分子异常，是体现在治疗后体内存在残留肿瘤细胞的生物标志物。

2.什么是全外显子检测，什么是肿瘤版WES？

全外显子组测序：

a)测序范围：人类全部外显子组编码区（＞20000个基因）

b)测序深度： 有效平均测序深度≥100×；20×覆盖度≥95%；

c)测序数据量：有效数据量≥10G；

飞朔生物自主研发肿瘤版WES（全外显子测序）检测，在WES的基础上增加肿瘤热点突变区域、常见基因融合相关的内含子区域、非编码区ClinVar致病性位点、SNP骨架和MSI区域的探针覆盖；基线样本检测结果覆盖导靶向治疗，免疫治疗和遗传风险评估。

3.什么是肿瘤先验分析，什么是肿瘤未知分析？两者有何特点？

肿瘤先验分析，即Tumor-informed策略：即先对患者肿瘤组织样本进行检测，以了解患者特异性基因组变异信息，再通过ctDNA监测肿瘤组织中存在的某些变异位点。在这种MRD监测路线中，肿瘤知情原则体现在：(1) ctDNA监测的位点选择和设定依赖于肿瘤组织中变异的检出情况；(2) MRD阴性或阳性状态的判断，取决于ctDNA是否监测到肿瘤组织来源的变异。Natera公司的Signatera产品就是tumor-informed策略的代表，基线通过对患者肿瘤组织进行WES检测以了解患者的变异信息，后续筛选16个位点进行个性化的ctDNA检测分析。

肿瘤未知分析，即Tumor-naïve策略：不依赖于肿瘤组织的变异检测，通过设计单癌种专属的固定化panel，仅通过血浆对患者进行ctDNA分析，也常在ctDNA检测变异的同时联合其他组学（如表观遗传学）等方法进行MRD分析判定。Guardant Health公司的MRD产品就是tumor-naïve策略的典型代表，在分析变异的同时也整合了甲基化分析，提升了预测的敏感性。

4.什么是MRD的定制化panel，什么是MRD的固定panel？

定制化Panel，指设计的panel没有固定基因与位点，对每位患者的组织进行大panel或全外显子/全基因组测序，综合考虑基因变异的类别、类型、丰度等因素筛选出一定数量的个性化即定制化基因，将选出的阳性基因作为参照基线，用于后续的定期监测比对。

固定Panel，指根据不同癌种的分子特征，一般包含各癌种的驱动基因以及分子靶向治疗靶点，利用固定基因/位点的panel进行高深度测序进行动态监测。

固定化与定制化panel在Tumor-informed和Tumor-naïve策略均可交叉组合应用，固定化panel更常见应用于无法获取组织案例的Tumor-naïve策略。

5.什么是药物假期？

药物假期，即间断治疗，指的是在长期使用某种药物达到满意疗效后，暂停用药一段时间，并依然维持疗效。停药时间可能持续几天，几个月，甚至有可能达到几年。药物假期并不是一个全新的概念，在其他需要长期服用的慢性病中早有应用，但在肿瘤治疗领域仍有待更多研究。

WCLC 2021报道了广东省人民医院的一项小型的探索性研究，这是CTONG 1602（NCT03046316）研究的一部分。

药物假期标准：1）影像学上无可见病灶（CT、MR或PET/CT）；2）MRD阴性；3）CEA阴性；患者一旦进入药物假期阶段，此间不接受任何治疗，只接受每3个月一次的CT、CEA和MRD监测；

药物再治疗标准：1）疾病进展（RECIST PD）；2）MRD阳性；3）CEA逐渐升高。

临床应用篇

1.MRD与肿瘤靶向测序有何不同？

肿瘤靶向测序主要针对对应肿瘤的靶向治疗，作为靶向治疗的补充诊断/依据，或作为靶向治疗耐药机制研究，靶向测序部分Panel还包含MSI、TMB、化疗敏感性评估等其他分子标志物。

MRD旨在发现分子残留病灶，评估治疗收益与监控复发，并不针对某种治疗手段，而是针对恶性肿瘤的系统治疗，通过患者个体化定制/固定panel的ctDNA变化趋势动态评估治疗收益，以及复发转移情况。

2.MRD目前适用于哪些癌种？

理论适用范围是包含所有实体瘤，有部分研究提示CNS肿瘤敏感度欠佳，目前在肺癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、食管癌、肝癌、胃癌、膀胱癌等癌种已有不少研究结果公布。

3.MRD在临床推广中有哪些应用场景？

围手术期综合管理：

a)新辅助治疗收益评估：活检样本基线分析+新辅助治疗周期动态监控（多次）

b)手术后分子残留病灶检测：术后样本基线分析+MRD（1次）

c)辅助治疗（术后/进展）收益评估：术后/活检样本基线分析+MRD（多次）

d)复发监控：术后/辅助治疗后基线分析+MRD（多次）

4.MRD的采样/监测时间如何选择？

目前对于MRD基线分析采样时机、检测时机均未发布相应指南及共识性文件统一标准，仅在2021年《非小细胞肺癌分子残留病灶专家共识》中描述为：ctDNA 的半衰期大约在35分钟左右且患者术后3 天的ctDNA 状态即可提示其复发风险（DYNAMIC研究）；首次MRD 检测时间窗都设定在根治性治疗后4个月内，而如果局部晚期NSCLC接受根治性放化疗后准备接受免疫检查抑制剂巩固治疗的, MRD检测的时间窗则定为根治性放化疗后至少1 周（CAPP-Seq研究）

目前在该指南中推荐：荐MRD首次检测的时间窗在NSCLC根治性治疗后1周到1个月之内。

5.没有组织样本或经过治疗的患者，能采用Tumor-informed策略的MRD吗？

采用Tumor-informed策略的MRD监测，需对肿瘤组织进行测序，根据患者个性化变异信息来定制MRD检测panel，该策略的局限性即为组织依赖性，故没有组织样本无法采用Tumor-informed策略的MRD。

经过治疗的患者：肿瘤存在空间、时间异质性，不同癌种的治疗方案都有可能改变肿瘤分子特征，既往肿瘤样本的基线分析与治疗后分子特征存在差异，故而可能影响检测结果准确性，目前指南与共识也并未形成统一意见，可采用复发/转移病灶进行基线分析，进行后续动态监测，或采用Tumor-naïve策略。

6.如术后首次MRD为阴性，临床做了术后辅助治疗，后续是否还需多次动态监测？

MRD阴性并不意味着患者没有复发转移风险，术后分子残留阴性也并不作为临床评价辅助治疗适用的唯一标准，即使首次MRD检测为阴性，后续也可动态监测复发转移情况，根据临床医生建议进行后续监测与诊疗。

飞朔生物篇

飞朔生物已推出实体瘤分子残留病灶（MRD）检测服务，产品检测panel覆盖面广泛，支持多种实体瘤MRD检测，满足临床需求。

1.实体瘤分子残留病灶（MRD）检测服务的技术路线是什么？

飞朔生物MRD采用定制化Panel检测策略，也称Tumor-informed assays，先对原发肿瘤组织进行全面的全外显子测序，确定患者特异的基因突变结果，然后定制个性化Panel对组织中的一定数量的突变位点进行后续的ctDNA检测。

肿瘤版WES检测（肿瘤组织+外周血）→筛选特异性突变位点→个体化定制panel→连续多次监测（外周血样本）

2.项目优势＆参数

•自主研发肿瘤版WES（全外显子测序）检测，在WES的基础上增加肿瘤热点突变区域、常见基因融合相关的内含子区域、非编码区ClinVar致病性位点、SNP骨架和MSI区域的探针覆盖；基线样本检测结果覆盖导靶向治疗，免疫治疗和遗传风险评估；

•个体化定制panel采用自研的单侧引物扩增结合UMI的测序文库构建技术；

•自动化监测位点筛选，通过突变位点的频率，基因的功能，突变类型和突变等级等指标加权评分，从位点的筛选提高监测的灵敏度；

•采用超高深度测序（100000X）结合UMI分析可以实现0.05%的突变检测灵敏，满足MRD的检测性能要求；

•基线分析+多次动态监测，肿瘤诊疗全周期MRD动态监控。

3.组合方案

灵活性全周期管理，多向选择：

•全外显子基线分析+1次动态监测

•全外显子基线分析+3次动态监测

•全外显子基线分析+6次动态监测

•全外显子基线分析+N次动态监测

适用于多种实体瘤的预后预测、复发风险评估、疗效监测。

——仅供科研参考使用——