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AccQ•Fluor 和 AccQ.Tag Ultra 试剂以相同的方式衍生化氨基酸,因为这两种试剂盒包含相同的组分。

AccQ•Tag Ultra 方法基于专门为氨基酸分析开发的衍生化试剂。Waters AccQ•Tag Ultra 试剂(6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯,或 AQC)是一种 N-羟基琥珀酰亚胺活化的杂环氨基甲酸酯(一种胺衍生化化合物)。

图 1-1 :Waters AccQ•Tag Ultra 试剂

试剂化学品

AccQ•Tag Ultra 试剂可将初级氨基酸和次级氨基酸转化为稳定的衍生物,如下图所示。所有氨基酸的衍生基团结构都相同,因此具有 UV 吸光度和荧光特性。过量的试剂水解产生 6-氨基喹啉 (AMQ),一种无干扰的副产物。注:衍生化峰标记在色谱图中,并始终会出现。其大小和含量因批次而异,并随时间变化。由于这种差异,峰的大小在定量上或诊断上都没有显著性。

图 1-2 :AccQ•Tag Ultra 反应:

与氨基酸反应

AccQ•Tag Ultra 试剂与伯氨基酸和仲氨基酸反应迅速,可生成高度稳定的尿素。在防止样品溶剂蒸发的情况下,所得衍生物可在室温下稳定长达一周。

试剂水解

在较慢的反应中,过量的试剂水解生成 6-氨基喹啉 (AMQ)、N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 和二氧化碳(请参阅下图)。过量的试剂会在一分钟之内分解。主要水解产物 AMQ 会产生一个明显的峰,很容易通过色谱分离。而 NHS 和二氧化碳不会干扰分析。

图 1-3 :在有水的情况下的 AccQ•Tag Ultra 反应

所有 AccQ•Tag 色谱中始终存在衍生化峰 (AMQ),必须将它与标记的氨基酸分离。

传统用于 HPLC 方法的 AccQ•Tag 使用荧光检测器和相关的 HPLC AccQ•Tag 洗脱液,因此,由于在荧光条件下的响应,AMQ 的峰高较低。

AccQ•Tag 衍生化峰 (AMQ) 对 UV 产生强响应,并且在 ACQUITY UPLC 系统上的 HPLC 和 AccQ•Tag Ultra 方法中可见。

相关信息:

AccQ Fluor Reagent Kit Care & Use Manual (《AccQ•Fluor 试剂盒维护和使用手册》,文献代码 wat0052881)

AccQ Tag Ultra Derivatization Kit Care & Use Manual (《AccQ•Tag Ultra 衍生化试剂盒维护和使用手册,文献代码 715001331)