细胞凋亡（Apoptosis）是一种有序的或者程序性的细胞死亡方式，是细胞受到特定基因调控后的主动性死亡过程，也是正常的细胞生理应答反应，凋亡的细胞最终将被体内吞噬细胞处理。过度的细胞凋亡将直接导致组织器官功能的下降；而对于癌细胞来说，凋亡过程中断则意味着癌症的发展和扩散。

通常可分为3个阶段。 细胞凋亡初期 是细胞的间接触消失，但是胞膜尚完整，粗面内质网上的核糖体脱落，细胞核出现固缩表现，本阶段持续时间很短； 细胞凋亡中期 是细胞核碎裂后与细胞内的各种细胞器结合，并进一步被质膜包裹形成凋亡小体； 凋亡晚期 是吞噬细胞吞噬凋亡小体，并将其消化为重新供机体使用。

正常细胞膜的磷脂分布是不对称的，活细胞中磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine, PS) 位 于 细胞膜的内表面，细胞凋亡时，细胞膜发生变化， PS 从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面。 Annexin V 是一种对 PS 有高度亲和力的、钙依赖性的磷脂结合蛋白， Annexin V 可以特异性地识别凋亡细胞表面的 PS , 而活细胞的 PS 位 于 细胞膜的内表面，无法与 Annexin V 特异性结合。所以可以用 FITC 偶联的 A nnexin V 鉴别凋亡细胞和活细胞。

坏死细胞的 PS 也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面， Annexin V 也能识别坏死细胞表面的 PS , 所以 Annexin V 无法区分坏死细胞和凋亡细胞。而 PI 染料能够与细胞内的 DNA 结合，区分坏死细胞和活细胞。早期凋亡细胞和活细胞的细胞膜仍然完整， PI 染料无法自由通过细胞膜进入细胞内与 DNA 结合，所以 PI 染料无法标记凋亡细胞和活细胞，而 PI 染料却能够通过坏死细胞的细胞膜与细胞内的DNA结合，坏死细胞内 PI 染料被 488nm 激光激发后会发射红荧光，被相应通道接收。所以 Annexin V 和 PI 同时使用，就可以区分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞。

④ 细胞凋亡—活化的 C aspase - 3 检测

C aspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中 C aspase - 3 为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。 C aspase - 3 正常以酶原（ 32 KD ）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的 Caspase-3 由两个大亚基（ 17 KD ）和两个小亚基（ 12 KD ）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞， Caspase-3 的活性明显下降。

活化的 C aspase - 3 由其前体裂解的一个 17KD 亚单位和一个 12KD 亚单位组成，形成异二聚体，可被 Anti-Active C aspase - 3 抗体特异性识别。用荧光素标记 Anti-Active C aspase - 3 抗体即可检测到活化的 C aspase - 3 。

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