碧云天-D2861-1μg-pCMV-jGCaMP7b (高亮度钙离子荧光探针)

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pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是用于钙离子(Ca2+)荧光检测的哺乳动物细胞表达质粒，表达的是经过突变和优化并适用于细胞或组织中钙离子荧光检测的M13-GFP-CaM融合蛋白。M13-GFP-CaM融合蛋白这个钙离子探针(calcium probe)中，环状排列的绿色荧光蛋白(circularly permuted green fluorescent protein, cpGFP)一端和钙调蛋白(calmodulin, CaM)融合表达，另一端与可以和钙调蛋白CaM相互作用的肌球蛋白轻链激酶M13 (也称RS20)肽链融合表达。这样当钙离子结合钙调蛋白时，可以改变钙调蛋白的构象，同时也会影响和钙调蛋白相互作用的M13的构象，钙调蛋白和M13的构象改变最终导致GFP的构象改变，从而影响其荧光的强弱，最终实现对于钙离子浓度变化的检测。

图1. GCaMP7系列蛋白结构图。其中pRSET A Tag中含有6X His tag。

碧云天构建的pCMV-jGCaMP7系列质粒(jGCaMP7b/jGCaMP7c/jGCaMP7f/jGCaMP7s)是最新一代基因编码的钙离子探针系列，适用于常见细胞的细胞内钙离子水平变化检测，并且特别适合用于监测特定条件下神经元中的钙离子水平的变化。

jGCaMP7系列的四个融合蛋白与GCaMP6系列相比，各有其突出特点：高亮度钙离子荧光探针jGCaMP7b (brighter baseline fluorescence)有更亮的本底荧光，并且灵敏度可达到GCaMP6s的3倍，未结合钙离子时的荧光强度比GCaMP6s增强50%；高对比度钙离子荧光探针jGCaMP7c (high contrast with low baseline fluorescence)有高对比度低和更低的背景荧光，并且灵敏度是GCaMP6s的2.7倍，对比度显著增强；快速响应型钙离子荧光探针jGCaMP7f (fast kinetics)具有快速动力学特点，反应速率是GCaMP6f的5倍和GCaMP6s的3倍，更加适合检测钙离子的动态变化；高灵敏度钙离子荧光探针jGCaMP7s (sensitive and slow) 具有高灵敏度但响应速度相对较慢的特点，灵敏度可达GCaMP6s的5倍以上，并且响应速率也比GCaMP6s快。

pCMV-jGCaMP7系列质粒是在针对其M13-GFP-CaM融合蛋白中肽链相互作用的界面区域进行突变筛选并优化而得到的。四个融合蛋白对应的突变氨基酸序列参考表1。

表1：jGCaMP7突变位点

Linker1 cpGFP Linker2 jGCaMP7s

jGCamP7b中的突变主要发生在cpGFP(H78K)、Linker2(L302P)和CaM(A317L/M374Y)上。pCMV-jGCaMP7b质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，该质粒为卡那霉素抗性。

pCMV- jGCaMP7b质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide Position CMV promoter 1-602 T3 promoter and T3 primer binding site 620-639 jGCaMP7b 693-2045 T7 promoter and T7 primer binding site 2107-2128 SV40 polyA signal 2140-2523 f1 origin of ss-DNA replication 2661-2965 bla promoter 2990-3114 SV40 promoter 3134-3427 Neomycin/kanamycin resistance ORF 3507-4298 HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 4299-4757 pUC origin 4886-5553

pCMV- jGCaMP7b质粒(5605bp)的图谱如下：

pCMV-jGCaMP7b质粒的详细图谱见说明书： https://www.beyotime.com/Manual/D2861 pCMV-jGCamP7b.pdf 。

pCMV-jGCaMP7b中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-jGCaMP7b)包括：

AsiSI BbvCI BglII BsiWI BsmBI BspEI BssHII BstEII BstZ17I EcoNI EcoRI EcoRV Esp3I HindIII PflMI PpuMI PshAI PspXI SgrAI

pCMV-jGCaMP7b中的单酶切位点（Restriction enzymes that cut pCMV-jGCaMP7b once）包括：

GT`MK,AC PflFI GACN`N,NGTC AflII C`TTAA,G PluTI G,GCGC`C G,GGCC`C CAC|GTG ApaLI G`TGCA,C PspOMI G`GGCC,C BamHI G`GATC,C C,TGCA`G NN` (N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN CG,AT`CG GC`TNAGC RsrII CG`GWC,CG BmgBI CAC|GTC SacII CC,GC`GG Bpu10I CC`TNA,GC G`TCGA,C BsaXI ,NNN` (N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` GCTCTTCN`NNN, BspQI GCTCTTCN`NNN, GGCCN,NNN`NGGCC CspCI ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` GGC|GCC DraIII CAC,NNN`GTG CCC|GGG G`GCGC,C SnaBI TAC|GTA C`AATT,G A`CTAG,T A`CGCG,T GCCC|GGGC TGG|CCA AGG|CCT GG`CG,CC TspMI C`CCGG,G CA`TA,TG Tth111I GACN`N,NGTC GC`GGCC,GC T`CTAG,A PaeR7I CTCGAG C`TCGA,G A`CATG,T C`CCGG,G

pCMV-jGCaMP7b的全序列信息: D2861PCMV-jGCaMP7b序列.txt

pCMV-jGCaMP7b质粒转染Hela细胞12h后，于培养基中加入Ionomycin (2μM)后150秒内的荧光变化效果请参考图2本产品网站上的视频。

图2. pCMV-jGCaMP7b质粒转染Hela细胞12h后2μM Ionomycin处理前后的荧光变化效果图。pCMV-jGCaMP7b质粒转染培养在六孔板中的Hela细胞12h后，先用PBS洗涤细胞2-3次，加入1ml DMEM，选择适当视野，在荧光显微镜下拍摄视频。开始拍摄5-10秒后，加入1ml含有4μM Ionomycin的新鲜DMEM培养液(最终浓度为2μM Ionomycin)，继续拍摄视频约2-3分钟。图中可见加入Ionomycin之前很细胞的荧光比较弱，加入Ionomycin后细胞的荧光逐渐变强，时间较长后荧光又会逐渐变弱。A. 未加Ionomycin；B. 加入Ionomycin 30s；C：加入Ionomycin 60s；D：加入Ionomycin 120s。

包装清单： D2861-1µg pCMV-jGCaMP7b(高亮度钙离子荧光探针) D2861-100µg pCMV-jGCaMP7b(高亮度钙离子荧光探针) 100µg 保存条件：

-20℃保存。

注意事项：

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。