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考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green 的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。
考马斯亮蓝R250(
Coomassie Brilliant Blue R250
)更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 µg蛋白。但是染色背景比较深，需要褪色后才能进行蛋白条带的观察。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到0.5 µg蛋白。但是因其在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在，选择性的和蛋白质结合形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质条带数秒内可以显现出来，约45 min后着色最深。而且染色背景低，不需要脱色即可进行蛋白条带的观察。因此，非常适合对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。
考马斯亮蓝G250较多的用于溶液体系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白结合检测法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250与蛋白质结合的特性，Bradford试剂（也就是酸化的G250溶液）为阳离子，主要为双质子化，溶液为红色，其最大吸收波长（Amax）为470 nm。当与蛋白稳定结合后，G250以阳离子，非质子化的形式存在，溶液变为蓝色，最大吸收波长迁移到595 nm。蓝色阳离子形式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因此通过直接测定595 nm的吸光度来反映蛋白量。此法的优点在于G250与蛋白质结合所需的时间较短（约2 min左右），且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1 h内保持稳定。反应灵敏度高，是一种非常常用的微量蛋白快速定量方法。
1）考马斯亮蓝G250染色液的配制
将0.2 g G250溶于100 mL水中（需要加热至50°C促进溶解）。冷却后，加入100 mL 2 N H2S04。室温放置3 h-过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，小心加入22.2 mL 10 N KOH，然后加入28.7 g TCA。混匀后室温放置>3 h，再次过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉淀。
2）染色只需将胶完全浸在此染色液中，约15 min后条带就会显示出来。几个小时后染色条带的亮度和灵敏度会进一步加强。
3）染色液室温约稳定存放2-3周。
2.Bradford蛋白定量检测（考马斯亮蓝G250）
参考Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白浓度测定试剂盒（货号：20202ES76）的操作步骤。
1）为了您的安全和健康，请穿实验服
并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
